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姜分儀有機(jī)氯測定蛋白質(zhì)的兩種方法

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?有機(jī)氯測定蛋白質(zhì)的兩種主要方法包括Lowry法和Biuret法。?具體內(nèi)容如下所示:


1.Lowry法


Lowry法是一種經(jīng)典的蛋白質(zhì)含量測定方法,基于酪氨酸和苯釕環(huán)的堿性條件下的氧化反應(yīng)。具體步驟如下:


①將待測樣品與堿性染料(如費(fèi)羅菲定)發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)。

②添加硫酸和焦磷酸銨將蛋白質(zhì)沉淀。

③用乙醇洗滌沉淀,形成可溶的復(fù)合物。

④測量復(fù)合物在750nm波長處的光吸收度,其值與蛋白質(zhì)含量成正比?。


?Lowry法?的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單,缺點(diǎn)是反應(yīng)耗時(shí)長,且易受表面活性劑、螯合物和硫醇還原劑的影響。


2.Biuret法


Biuret法通過檢測在堿性條件下蛋白質(zhì)與銅離子發(fā)生的絡(luò)合反應(yīng)來測定蛋白質(zhì)含量。具體步驟如下:


①將蛋白質(zhì)樣品與堿性染料溶液(如雙縮脲試劑)混合,形成藍(lán)色絡(luò)合物。

②加入硫酸銅溶液,絡(luò)合物轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙j(luò)合物。

③在560nm波長處測量吸光度,用于定量測定蛋白質(zhì)含量?。

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?Biuret法?的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便,缺點(diǎn)是測量范圍較窄,通常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定?。


需要注意的是這兩種方法的選擇取決于實(shí)驗(yàn)條件、樣品性質(zhì)以及所需精度等因素。


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